Analýza zmrazeného řezu
To je nezbytné, pokud chirurg potřebuje informace o tkáni odstraněné během operace, aby mohl rozhodnout o průběhu zákroku. Například malý maligní nádor je odstraněn z ledvina. Nyní je nutný rychlý řez, aby se zjistilo, zda byl nádor zcela odstraněn nebo zda na okrajích vzorků tkáně stále existuje obrovské množství maligní tkáně.
Nakonec výsledek vyšetření zmrazeného řezu určuje průběh operace a další terapeutický plán pacienta. Jak funguje vyšetření zmrazené sekce? Během 10 minut se tkáň stabilizuje zmrazením na -20 ° C, poté se na takzvaném mikrotomu provede řez o tloušťce 5 - 10 μm. To se umístí na sklíčko, malou skleněnou desku a rychle se obarví. Na konci jsou nálezy prozkoumány pod mikroskopem a výsledek lze okamžitě předat na operační sál.
Metody barvení
Za posledních 120 let se vyvinulo mnoho metod histologického barvení. Buněčné struktury a tkáně se dělí na bazofilní, acidofilní a neutrofilní buňky na základě barevné reakce s barvicími činidly. Dále existují také agyrofilní a nukleofilní struktury.
Bazofilní barví vše, co obsahuje kyselou skupinu a je barveno bazickým barvivem (například hematoxylinem nebo methylenovou modří). Struktury, které jsou acidofilní, jsou zásadité, a proto je lze obarvit erozí nebo kyselým fuchsinem (kyselá barviva). Patří mezi ně cytoplazma a Kolagen vlákna.
Neutrofilní nebo lipofilní složky nemohou reagovat s kyselým ani zásaditým barvivem, a proto nemohou být obarveny. Agyrofilní složky mohou vázat ionty stříbra a převést je na elementární stříbro. Nukleofilní (jádro = buněčné jádro, milující buněčné jádro) barevná reakce je výsledkem nukleofilních barviv v buněčné jádroJedná se o DNA vázající nebo bazické látky, které se vážou na nukleové kyseliny.
Dnes jsou osvědčené metody chemického barvení doplněny imunologickými metodami. Reakce antigen-protilátka se v této technice používá k detekci určitých vlastností buněk. Reakci lze poté zviditelnit sofistikovanou technikou.
Často používané metody barvení jsou: HE barvení = barvení hematoxylin-eosinem: Hematoxylin, přírodní barvivo, barví všechny struktury modře, které jsou bazofilní (= milující bází) a proto kyselé, jako je DNA, buněčná jádra, ribozomyEosin je naproti tomu vyráběn synteticky. Eosin obarví všechny buněčné struktury červeně, pokud jsou acidofilní (= kyselinou milující) nebo zásadité.
Projekt Proteinů cytoplazmy, mitochondrie, a Kolagen jsou mezi nimi. Azanové barvení: Skládá se z prvních písmen obou barev, azokarmínu G a anilinové modro-zlaté oranžové: Toto skvrny buněčné jádro a svalová vlákna červená a cytoplazma načervenalá. Kolagen a retikulární vlákna se při tomto barvení zbarví modře.
K barvení se používá barvivo Giemsa (Giemsa Azure-Eosin-Methylene Blue) krev buněčné nátěry. Jádra buněk lze snadno rozpoznat podle reakce fialové barvy. Cytoplazma má modravé skvrny.
Při barvení elastikou (resorcinol-fuchsin-orcein) jsou všechna elastická vlákna zobrazena černo-fialově. Způsob barvení podle van Giesona je charakterizován skutečností, že barvení se nejprve provádí hematoxylinem. Poté se použije fuchsin kyseliny pikrové (mikrofuchsin) nebo thiazin kyseliny pikrové.
Nakonec buněčná jádra vypadají černo-tmavě hnědá, cytoplazma vypadá spíše světle hnědá. Kontrastní barvení thiazinem kyselinou pikrovou barví elastická vlákna a svalovou tkáň oranžově žlutě a kolagenová vlákna červeně. Při trichromovém barvení podle Masson-Goldnera je velikost molekuly barviva nejdůležitějším faktorem metody barvení.
Používá se hematoxilin železa, obvykle se třemi dalšími barvivy, a to kyselá liška, oranžová G a světle zelená. Barví kolagenně pojivové tkáně a hlenově zelená, buněčná jádra modročerná, cytoplazma červená, svaly bledě červené a červené krev buňky (erytrocyty) oranžová červená. Kromě toho existuje Gramovo barvení, které slouží k rozlišení bakterie.
Gram-pozitivní bakterie jsou obarveny modře a gramnegativní bakterie jsou obarveny červeně. Barvení Ziehl-Neelsen se také používá pro bakterie, jmenovitě ty, které jsou odolné vůči kyselinám a například ukazují tuberkulóza patogeny červeně. Mezi další metody barvení, které by zde měly být zmíněny, patří reakce Berlin-Blue, která je zodpovědná za detekci trojmocných iontů železa v tkáňových řezech, a metoda barvení hematoxylinem železa podle Heidenhaina.
