Singl-gen analýza je cílená metoda genetického testování.
V rámci tohoto postupu je podezření na dědičné onemocnění, které je vyvoláno jedinou změnou v a gen, je vyšetřován gen podezřelý jako příčinný. To se také často provádí rutinně jako součást screeningových vyšetření.
Indikace (oblasti použití)
- Diagnóza monogenních onemocnění např cystická fibróza.
Postup
Potřebný materiál
- Heparinová krev (minimálně 1-2 ml)
Příprava pacienta
- Není nezbytné
Rušivé faktory
- Není známo
Laboratorní metoda
Nejčastěji je metoda sekvenování používaná v jedno-gen analýza je Sangerova metoda, nazývaná také syntéza zakončení řetězce, kde nejprve dojde k izolaci DNA z krev. Pak všichni vodík vazby, které slouží k udržení dvouvláknové DNA pohromadě, jsou přerušeny. Po zahřívání na 94-96 ° C po dobu jedné minuty jsou přítomna dvě jednoduchá vlákna. Dále nastává takzvaná hybridizace primeru, přičemž je připojen primer. K tomu dochází při teplotě asi 60 ° C. Primer je oligonukleotid (oligomery složené z několika nukleotidů), který slouží jako výchozí bod pro replikaci DNA enzymy jako je DNA polymeráza. Po hybridizaci primeru probíhá extenze, při které se teplota zvýší na 72 ° C. To umožňuje primeru připojit se k DNA polymeráze (enzymy které syntetizují DNA). Po průměru 30 cyklů lze proceduru zastavit.
Další analýzu provádí kapilární elektroforéza v automatických sekvencerech. Výsledek se nazývá elektroferogram. To ukazuje různé barvy označující základní sekvenci.
Touto metodou lze detekovat mutace zahrnující pouze jednu nukleovou bázi v genu, známé také jako bodové mutace.
