Postup
Pokud se provádí přímý Coombsův test, červená krev buňky jsou odfiltrovány z pacientovy krve. Je třeba otestovat, zda existují protilátky typu IgG, které způsobují hemolytickou anémii nebo krev skupinová nekompatibilita v těle. Sérum Coombs obsahuje protilátky proti lidským IgG protilátkám.
Směs se zahřívá (inkubuje) po delší dobu. Pokud existují protilátky na červenou krev buňky se shlukují a test bude pozitivní. Nepřímý Coombsův test se skládá ze dvou částí.
Cílem je stanovit protilátky, které jsou volně přítomny v krvi a nejsou vázány na krevní buňky. Tentokrát je kapalná část (sérum) filtrována z krve pacienta. Nejprve se do testu přidají červené krvinky.
Pokud jsou v séru volné protilátky, váží se na červené krvinky. Tato reakce není viditelná. Teprve ve druhém kroku, jako v přímém Coombsově testu, se přidá a zahřeje Coombsovo sérum s protilátkami proti lidským protilátkám. Pokud je výsledek pozitivní, roztok také aglutinuje.
Hodnocení
Pokud jsou protilátky kombinovány s odpovídajícím sérem Cooms, protilátky séra (tekutá část krve) se váží s protilátkami pacienta. Protilátky mají strukturu ve tvaru Y, což znamená, že mohou vždy vázat dva vazebné partnery a vzájemně tak zesíťovat červené krvinky. To má za následek velkou akumulaci krevních buněk.
Tyto shluky se stanou viditelnými - krev se shlukuje (shluky) a test je pozitivní. Pokud pacient nemá žádné protilátky, sérum zůstává tekuté. Není vidět žádná změna - test je negativní.
Jaké jsou alternativy?
Alternativa k Coombsův test je imunologický postup ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay), při kterém jsou určité protilátky označeny enzymem. Tato protilátka se přidá k testovanému roztoku. Pokud značené protilátky reagují s protilátkami testovaného roztoku, aktivuje se vázaný enzym a vytvoří se barvivo.
Odpovídající zkumavky mění barvu - test je pozitivní. Kromě postupu ELISA existuje také WESTERN-Blot, který se často používá jako potvrzovací test pro pozitivní ELISA.
