Test ELISA je laboratorní lékařské vyšetření, při kterém dochází k tzv. Reakci antigen-protilátka. Lze testovat různé antigeny, které hrají roli v humánní nebo veterinární medicíně. K provedení zkoušky v Německu jsou pověřeny pouze akreditované laboratorní ústavy.
Co je postup?
V rámci laboratorních lékařských vyšetření patří test ELISA k tzv. Imunologickým postupům. Postupem testu protein molekuly lze detekovat zcela odlišně tělní tekutiny. ELISA je zkratka pro Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay. Jedná se tedy o označení v anglickém jazyce, které se však v německé medicíně stalo zavedeným. Test ELISA patří k takzvaným imunologickým postupům v rámci laboratorních lékařských vyšetření. Zkušební postup lze použít k detekci bílkovin molekuly v široké škále tělní tekutiny. Detekce těchto molekuly zase umožňuje vyvodit závěry o určitých onemocněních nebo klinických obrazech, a proto lékaři také svou diagnózu závisejí na výsledku takového testu ELISA. Zkušební postup má proto v každodenní klinické praxi velký význam, ať už v ambulantní nebo lůžkové péči. Korespondence tělní tekutinynapříklad celý krev nebo tekutiny z klouby, jsou odesílány do laboratoře ihned po odebrání od pacienta. Obvykle se jedná o velmi urgentní vzorky, protože původní materiál je považován za citlivý a měl by být vyšetřen co nejrychleji. Tzv. Nadhodnocené vzorky mohou vést k falešně negativním výsledkům, protože patologické Proteinů které byly mezitím detekovány, byly sníženy nebo zcela degradovány. Tedy takzvaná preanalytika hraje v testu ELISA důležitou roli; podezřelé nebo negativní výsledky by měly být znovu opakovány, pokud jsou k dispozici vhodné klinické příznaky.
Funkce, účinek a cíle
Pro správné provedení testu v akreditované lékařské laboratoři jsou naprosto nezbytné zkumavky a takzvané mikrotitrační destičky. Tyto destičky s jemnými polokonkávními prohlubněmi jsou vyrobeny ze speciálního plastu a každá je potažena velmi specifickou protilátkou. Pokud je antigen, který má být detekován, přítomen v tělní tekutině, která má být vyšetřena, pak dojde k specifické reakci antigen-protilátka podle takzvaného principu zámku a klíče. Vzorkový materiál může být vložen do destiček buď ručně laboratorním personálem pomocí pipet, nebo plně automaticky. V moderních laboratorních lékařských ústavech se pro diagnostiku ELISA používají pouze plně automatizované systémy. Musí však být sledovány vyškoleným personálem, zdravotnicko-technickými laboranty. Tzv. Interní a externí kontrola kvality je také odpovědností personálu laboratoře, nadřazeného zdravotnickému personálu pro laboratorní medicínu, infekční nemoc epidemiologie a mikrobiologie. Po první testovací dávce, tj. Poté, co byl materiál pipetován na destičky, se specifické antigeny ve vzorku, pokud jsou přítomny, již navázaly na protilátky na plastové desce. Poté se provede promytí fyziologickým roztokem, aby se odstranily interferující faktory, jako jsou nežádoucí antigeny nebo Proteinů z přípravy. Tento krok je velmi důležitý, aby se zabránilo falešně pozitivním reakcím. Falešně pozitivní výsledek interpretovaný laboratoří může mít pro pacienta fatální následky. Ve druhém kroku testu se přidá další protilátka spojená s enzymem. Tato značená protilátka se také váže na antigen. Ve třetím a posledním kroku se přidá speciální barvivo v definovaném množství, které je ve větší či menší míře degradováno zbytky enzymů, které jsou stále přítomny. Lze degradovat pouze takový enzym, který nebyl předtím navázán na antigen společně s protilátkou. Volný enzym je schopen štěpit přidané barvivo. Přesné množství štěpeného barviva lze přesně určit jinou laboratorní metodou, takzvanou fotometrií. To umožňuje vyvodit přesné závěry o tom, zda je antigen ve vzorku materiálu vůbec, a pokud ano, kolik. Test ELISA se používá nejen pro počáteční diagnózu nebo pro potvrzení podezření na diagnózy určitých nemocí a klinických obrazů, ale také sledovat jejich pokrok. Pokud je antigen koncentrace v testu se v průběhu roku sníží terapieje terapie považována za úspěšnou.
Rizika, vedlejší účinky a nebezpečí
Test ELISA získává svou informativní hodnotu především detekcí antigenních struktur v tělních tekutinách. Test umožňuje tzv. Kvalitativní, ale také semikvantitativní a kvantitativní prohlášení o podezření na přítomnost určitých antigenů v tělních tekutinách. Celý krev nelze použít pro test, pouze krevní sérum. Přímý test na pacienta, například z kapilární krev z koneček prstu, proto není, stejně jako u některých jiných sérologických testů, dosud možné. V humánní medicíně se test ELISA primárně používá k detekci antigenů při bakteriálních, virových nebo plísňových infekcích. Kromě toho všechny pozitivní výsledky zánět jater sérologie se znovu kontroluje standardně testem ELISA. Určitý hormonů, například těhotenství hormon HCG, lze také určit pomocí testu ELISA. Pokud v průběhu dojde k určitým komplikacím těhotenství, přesná znalost koncentrace těhotenského hormonu v krvi je diagnosticky a terapeuticky velmi užitečné. Další indikací testu je detekce takzvaných paraproteinů v moči, které se vyskytují například v různých nádorová onemocnění, jako je mnohočetný myelom. Test ELISA se dodnes provádí v mnoha laboratořích, ale je odborníky považován za zastaralý. Imunitní reakce spojená s enzymy v testu ELISA byl v posledních letech stále více nahrazován radioaktivně značenými protilátky, které poskytují ještě lepší výsledek kvantitativního měření. Tyto testy se také nazývají RIA, Radio Immunabsorbent Assay. Dalším specifickým pokrokem v testu ELISA jsou lehké chemické metody, jako je luminiscence nebo fluorescence.
