Morfologie erytrocytů, mikroskopie fázového kontrastu

Mikroskopie fázového kontrastu je diagnostický postup používaný v urologii a nefrologii (studium ledvin) pro vyšetření a hodnocení cytomorfologických vitálních vzorků (vzorek se živými buňkami) v diagnostice hematurie a močového sedimentu. Mimořádný význam této metody spočívá zejména v možnosti diagnostiky hodnotit morfologii erytrocytů (tvar červené krev buňky), které mohou poskytnout cenné informace o původu možné hematurie (krev v moči) nebo erytrocyturie (červené krvinky v moči). Mikroskopie fázového kontrastu močového sedimentu je ideální pro hodnocení různých forem erytrocytyZavedení mikroskopie s fázovým kontrastem do rutinní diagnostiky lze považovat za hlavní pokrok, protože usnadňuje rozlišení patognomonických složek moči od nepatologických artefaktů. Mikroskopie s fázovým kontrastem je lepší než mikroskopie ve světlém poli, která se používala až do zavedení mikroskopie s fázovým kontrastem, s ohledem na diferenciaci artefaktů. Pokud je k dispozici nejasný nebo neprůkazný nález, uchýlení se k tomuto postupu může ušetřit méně užitečná opatření, jako je radiologická nebo cystoskopická diagnostika (cystoskopie) pro glomerulární hematurii (viz níže), čímž se sníží náklady a ušetří čas léčby.

Indikace (oblasti použití)

Mikroskopie fázovým kontrastem se používá v urologii a nefrologii ke studiu morfologie erytrocytů:

• Hodnocení cytomorfologických vitálních vzorků při diagnostice hematurie a močového sedimentu. Indikace:> 6-8 erytrocyty/ l detekovatelný v moči nebo v pozitivním pruhu. V rámci morfologie erytrocytů se diferenciace glomerulární hematurie od nerenální erytrocyturie provádí detekcí dysmorfní (glomerulární) a eumorfní erytrocyty.
• Dysmorfní hematurie glomerulárního původu se vyskytuje u pacientů s membranózní a membranoproliferativní glomerulonefritida, stejně jako IgA nefropatie, fokální a segmentální nefroskleróza a lupusová nefritida. Při glomerulární hematurii jsou erytrocyty protlačovány poškozenými bazálními membránami glomerulárních kapilár, což způsobuje poškození. Mikroskopicky lze rozeznat dysmorfní erytrocyty, které se také nazývají akantocyty (= erytrocyty s ušima „Mickey Mouse“).
• Eumorfní hematurie (postglomerulární hematurie) se vyskytuje u pacientů s ledvinové cysty při prasknutí do dutého systému, měchýř Bilharzia, krev příměs z pochvy (vagina), poranění po umístění a katétr močového měchýře, krev poruchy srážlivosti atd.

Postup

Princip mikroskopie s fázovým kontrastem je založen na interferenci světelných paprsků v dráze paprsku mikroskopu, čímž lze dosáhnout vysoce kontrastního obrazu nezbarvených buněk. Struktura a funkce mikroskopu s fázovým kontrastem:

• Prstencová clona, ​​kondenzátor, prstencová fázová destička a objektiv jsou pro funkci fázového kontrastního mikroskopu obzvláště důležité. Vložením prstencového otvoru do kondenzátoru a fázové desky do objektivu dojde k oddělení nedifrakčních a difrakčních paprsků světla. Výsledné zpoždění vlnové délky paprsků rozptýleného světla evokuje fázový rozdíl, který opticky způsobí, že strukturální detaily zkoumaného mikroskopického objektu vypadají tmavší než okolní médium. Fyzicky fáze destičky převést rozdíly fáze nebo dráhy na rozdíly amplitudy. V důsledku těchto amplitudových rozdílů se obraz objektu objeví v mikroskopu vzájemným rušením nebo zesílením přímých světelných paprsků procházejících objektem a ohýbaných na objektu.
• Nevýhodou tohoto principu je tedy skutečnost, že ideální fázové přípravy nejsou pravidlem, protože amplitudové efekty jsou obvykle superponovány na fázové efekty.
• Na základě principu zobrazování struktur pomocí rozdílů amplitud jsou stávající buněčné struktury reprezentovány jako odstupňované odstíny šedé v závislosti na jejich vlastní optické hustota. Pro zlepšení reprodukce struktur, použití tenkých přípravků a fáze destičky je uvedeno. V závislosti na povaze různé fáze destičky, lze dosáhnout pozitivních i negativních fázových kontrastů, což má za následek, že jsou objekty zájmu zobrazeny tmavší nebo jasnější než jejich okolí.
• Ve fázové kontrastní mikroskopii je dále důležité si to uvědomit nekróza (smrt buněk) může nastat relativně rychle v důsledku vystavení světlu a dalšího poškození životně důležitých buněk. V důsledku tohoto rychlého nekróza vývoje, musí být posouzení sklíček provedeno během jedné až dvou hodin, aby byla zachována doba platnosti diagnostického opatření. Toto časové omezení hodnocení životně důležitých vzorků tedy obvykle vyžaduje dokumentaci pomocí mikrofotografie nebo, je-li to nutné, provedením mikrokinematografie. Mikrofotografie je fotografie mikroskopického obrazu pořízená kamerou připojenou k mikroskopu. Prostřednictvím mikrokinematografie existuje možnost zachytit objekty pod mikroskopickým pozorováním v pohyblivých obrazech.