Imunoelektroforéza se používá pro laboratorní diagnostickou detekci monoklonální protilátky u pacienta krev. Monoklonální protilátky jsou odvozeny ze stejné buňky a jsou namířeny proti stejným antigenům. Z tohoto důvodu jsou považovány za patologické a jsou-li zjištěny, naznačují choroby, jako je Waldenströmova choroba.
Co je to imunoelektroforéza?
Imunoelektroforéza se používá pro laboratorní diagnostickou detekci monoklonální protilátky u pacienta krev. Iony mají diferenciální pohyblivost. Tato diferenciální mobilita tvoří základ metod elektroforézy. Tyto metody oddělují navzájem různé látky pomocí elektrických polí a gravitace. Jednou dobře známou metodou v oboru je imunoelektroferéza. Jedná se o kvalitativní diagnostický postup používaný k detekci monoklonální protilátky. Protilátky jsou imunologicky aktivní proteinové látky specifické buněčné linie. Monoklonální protilátky všechny pocházejí ze stejného B lymfocytu a jsou tedy namířeny proti jedinému epitopu. Jakákoli přirozená imunitní reakce proti napadajícím antigenům odpovídá polyklonální reakci a je tedy namířena proti různým epitopům. Monoklonální imunitní odpověď proto poskytuje důkazy o patologických procesech těla. Monoklonální protilátky vázat jinak molekuly s vysokou specificitou. Tuto vazbu lze zjistit pomocí imunoelektroforéza. Metoda je kvalitativní laboratorní diagnostický postup a skládá se ze dvou typů postupů, elektroforézy v séru a imunodifúze.
Funkce, účinek a cíle
Imunoelektroforéza kombinuje metodiku elektroforézy v séru s imunodifúzí. Sérum pacienta se umístí na agarózový gel nebo film z acetátu celulózy. Rovněž se aplikuje kontrolní sérum. Po aplikaci následuje elektroforetická separace vzorků. Antiséra, IgG, IgA, IgM, octová kyselina pro normální elektroforézu a kappa a lambda se aplikují mezi separační linky. Tím se zahájí reakce s protilátkami séra pacienta, která generuje srážecí linie. V závislosti na použitém antiséru a poloze a tvaru jednotlivých linií lze vyvodit závěry o imunoglobuliny s lehkými řetězci kappa nebo lambda. V případě lambda pásu jsou přítomny volné lehké řetězce protilátek. Pomocí vzácných IgE a IgD poskytuje laboratoř další důkazy, které umožňují přesné stanovení imunoglobuliny. Procedura imunodifuzní elektroforézy probíhá podle Pierra Grabara a Curtise Williamse a odpovídá kombinaci elektroforézy na agarózovém gelu Proteinů a difúze protilátek. Nejprve proběhne elektroforéza na agarózovém gelu. Poté obsažené protilátky difundují proti pásům antigenu a tím způsobují srážení oblouků. Toto by mělo být odlišeno od Laurellovy Rocketovy imunoelektroforézy, která odpovídá elektroforéze Proteinů v agarózovém gelu, z nichž každý obsahuje specifické protilátky koncentrace. Gel obsahuje mírně zásaditý pufr, který umožňuje migraci pouze antigenů, čímž tlačí většinu protilátek do izoelektrického bodu vystavením mírně zásaditému pH, dokud se nepřestanou elektroforeticky pohybovat. Na začátku Rocketovy imunoelektroforézy je nadbytek antigenu, takže se tvoří rozpustné komplexy antigen-protilátka. Během elektroforézy dochází k další vazbě mezi antigeny a dalšími protilátkami. V bodě ekvivalence se tímto způsobem tvoří imunoprecipitáty, připomínající raketové postavy s výškou úměrnou antigenu koncentrace. Pro vyhodnocení testu se měří výška sraženiny.
Rizika, vedlejší účinky a nebezpečí
Detekce monoklonálních protilátek je zvláště důležitá pro diagnostiku mnohočetného myelomu a Waldenstromovy choroby. Získaná detekce svědčí o maligní degeneraci imunitních buněk. Mnohočetný myelom odpovídá a rakovina z kostní dřeň charakterizovaná maligní proliferací buněk produkujících protilátky v plazmě. Tyto plazmatické buňky produkují protilátky a jejich fragmenty. Maligní plazmatické buňky vždy pocházejí ze společné progenitorové buňky a jsou tedy geneticky identické. Produkují výhradně monoklonální protilátky. Malignita tohoto onemocnění může odpovídat prekanceróznímu stádiu, ale může také dosáhnout vysoce maligního stadia, které je bez léčby rychle smrtelné. Příznaky nemoci jsou důsledkem maligního růstu buněk nebo protilátek a fragmentů protilátek. Mezi nejčastější příznaky patří bolest kostí, rozpouštění kostí a spontánní zlomeniny kostí. Vápník úrovně v EU krev jsou často zvýšené. Kromě toho se abnormální protilátky často usazují v tkáních a způsobují dysfunkci orgánů, což může vést na projevy jako např ledvina selhání nebo zhoršený průtok krve. Waldströmova choroba je také maligní nádorové onemocnění. Přesněji řečeno, je to maligní lymfom onemocnění, které je klasifikováno jako pomalu progresivní a téměř asymptomatickéHodgkinův lymfom. Ve většině případů lze u onemocnění detekovat abnormální produkci monoklonálního IgM, která je způsobena maligními aktivitami lymfom buňky. Waldenströmova choroba je ve svých charakteristikách extrémně podobná mnohočetnému myelomu, ale obvykle vykazuje příznivější průběh. Většina pacientů s Waldenströmovou chorobou je do stanovení diagnózy do značné míry asymptomatická. U ostatních pacientů se projevují časné příznaky, například nespecifické únava nebo periferní neuropatie vyplývající z ukládání monoklonálního IgM v myelinová vrstva. I malé množství IgM může způsobit polyneuropatie. U ostatních pacientů polyneuropatie nedochází ani při vysokých úrovních. Kromě toho nespecifické příznaky, jako je horečka, nežádoucí úbytek hmotnostinebo se může objevit noční pocení. Bolest kostí je také charakteristická. Kvůli nadprodukci IgM se krev stává hyperviskózní, takže výše uvedené příznaky mohou souviset s příznaky hyperviskozitního syndromu. Tento sklon ke krvácení se ve většině případů projevuje často krvácení z nosu, bolesti hlavy, celkový pocit nevolnosti nebo rozmazaného vidění a akustické potíže. K detekci malignit tohoto typu se imunoelektroferéza již dlouho stala standardním diagnostickým postupem.
